CLONING, EXPRESSION AND PURIFICATION OF DSBA PROTEIN OBTAINED FROM Brucella melitensis تنسيل وتعبير وتنقية بروتين الـ DsbA الناتج من بکتريا البروســيلا الضـأنيـة

Document Type : Original Article

Authors

1 Biological (Zoology) Dept. Fac. of Science, Demascus Univ.

2 Biological (Botany) Dept., Fac. of Science, Demascus Univ.

3 Molecular Biology and Biotechology Nuclear Energy Tound. Syria

Abstract

ضُخمت المورثة المرمزة لأنزيم أکسيدو ريدوکتاز ثنائي السلفوئيد انطلاقاً من جينوم البروسيلا الضأنية عن طريق تقنية التفاعل السلسلي للبوليميراز الـ PCR وباستخدام مرئسات نوعية، ومن ثم تم إدخالها في بلازميد التعبير الجيني الـ pET-15b. وبالتالي تم إدخال البلازميد pET-15b / dsbA  في نظام التعبير البروتيني لبکتيريا الاشريشکية القولونية E.coli BL21DE3، حيث تم التعبير عن هذه المورثة بشکل عالي بوساطة التحريض بالـ IPTG. ولقد أظهر التحليل باستخدام هلامة الرحلان البروتيني SDS-PAGE بأن البروتين المعبر عنه يمتلک وزن جزيئي بحدود 28 kDa. کما تم تنقية هذا البروتين المأشوب فيما بعد باستخدام عمود الألفة للمخلب المعدني.   

Keywords